01、新冠抗原试剂实验室性能评价造成“假阳”或“假阴”的常见问题

Q1：新冠抗原检测试剂可以使用任意样本保存液吗？

优先使用各厂家配套样本保存液，试剂性能（特异性和灵敏度）与配套保存液pH值有关。多数层析产品抗原抗体免疫反应的最适pH为碱性时，试剂特异性和灵敏度最优；当使用非配套的样本保存液（如PBS）会导致反应环境的pH值接近抗体等电点时，会发生凝聚反应，造成假阳或假阴的结果。

 

Q2：新冠抗原检测试剂可以使用灭活型核酸病毒采样管吗？

目前各厂家均不推荐使用灭活型核酸病毒采样管（含蛋白变性剂胍盐等的样本保存液），胍盐会使蛋白（抗原、抗体）变性，无法形成抗原抗体复合物，造成假阴或无效结果。

 

Q3：使用冻存样本评价新冠抗原试剂性能是否合适？

建议样本采集后应尽快测试，如不能立即检测，建议2℃-8℃条件下可保存1天，-70℃及以下可保存12个月，冷冻样本检测前须完全融化、充分恢复至室温，混合均匀后方可使用；样本反复冻融次数不超过3次，否则蛋白质降解会造成假阴结果。

 

Q4：使用质控品或病毒培养物评价新冠抗原试剂时，应选取何种缓冲液进行配制？

需使用试剂盒配套样本保存液稀释配制，更换纯水或PBS等会存在一定的基质效应，无法保证试剂最优性能，从而影响试剂的评价结果；由于蛋白的相互结合主要靠氢键结合力、静电引力、范德华力、疏水作用，当反应体系中盐分浓度极低时，抗体之间易产生非特异性结合，造成假阳结果。

 

02、新冠抗原试剂实验室性能评价影响因素的研究

新冠快速抗原检测（rapid antigen detection, RAD）试剂因其成本低廉、操作简单、10-20min可获得检测结果以及可作为病原学诊断依据等特点，被部分新冠病毒流行的国家和地区大量应用。RAD试剂的灵敏度除受到技术原理的限制，样本中的病毒浓度、病毒感染时间、样本采集质量、样本处理方式等因素都可能影响RAD试剂的检测效力。

 

近期发表的研究论文[3,4]针对不同灭活方法、病毒转运试剂（VTM）和样本保存方式对新冠RAD试剂检测能力的影响进行了研究报道，主要包括：

1、 在灭活方法上：热灭活后RAD试剂的最低检测限（LOD）升高是未经灭活时的2-8倍；β-丙内酯（直接与病毒核酸作用，不作用于病毒结构蛋白，不破坏病毒的免疫原性）灭活方法对RAD试剂检测的LOD无显著影响。胍盐灭活可使病毒蛋白变性，溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致无法形成抗原抗体复合物，从而严重影响RAD试剂检测结果。

 

2、 病毒转运试剂（VTMs）：使用4种VTMs液测试RAD试剂检测灵敏度，结果发现2种VTM显著降低RAD检测灵敏度，其中，在中、低浓度的样本甚至无法检出（检出结果参考标准比色卡）。

 

3、 样本存储条件和处理方式：实验对存储时长、存储温度及冻融操作对RAD检测试剂的影响也做了研究，将不同浓度水平样本按照不同处理方式和存储条件处理后，测定结果显示随着保存时间的延长和冻融循环次数的增加，RAD试剂盒的检测值均出现不同程度的下降。

 

4、 不同缓冲体系：在 FDA更新的模板[5]中着重提到了缓冲液（PBS、生理盐水）对抗原检测试剂盒的影响，有可能导致抗原检测试剂盒灵敏度降低，准确度不足，与临床验证数据偏差较大。

 

综上研究数据表明，基于核酸检测和抗原检测的本身原理的不同及各厂家自主研发的抗原检测试剂原料抗体本身的特性，在RAD试剂实验室临床评价过程中，建议优先采用厂家说明书中推荐所标识的样本保存方式、VTM、缓冲体系等条件，这样可以极大程度真实反应抗原检测试剂盒的临床性能，既可以减少重复试验带来的人力浪费，又可避免采用实际病毒蛋白结构已经被破坏的样本进行实验所导致结果数据失真情况出现。